Microscopia
Microscopia básica para identificação de esporos
Procedimento de preparo de lâmina, focagem e medição de esporos em campo claro 400×.
Ferramentas necessárias
- Microscópio óptico campo claro com objetivas 10×, 40× e 100× (imersão opcional)
- Lâminas e lamínulas de vidro limpas
- Pipeta Pasteur ou conta-gotas estéril
- Solução KOH 3 % (clareamento) ou Melzer (opcional, para reação amiloide)
- Régua micrométrica calibrada na ocular
Procedimento passo a passo
- Passo01
Preparo da lâmina por suspensão
Em superfície limpa, pingue 1 gota da cultura líquida (após homogeneização) ou suspensão de esporos no centro de uma lâmina. Cubra com lamínula em ângulo de 45° para evitar bolhas.
- Passo02
Focagem progressiva
Comece em objetiva 10× para localizar áreas com esporos densos. Suba para 40× para confirmar a morfologia. Para medição precisa, use 100× com óleo de imersão.
- Passo03
Identificação morfológica
Esporos de Psilocybe cubensis: elipsoides a sub-romboidais, parede espessa, cor marrom-púrpura quando maduros. Poro germinativo visível na extremidade apical. Tamanho típico: 11,5–17 × 8–11 μm.
- Passo04
Medição com régua micrométrica
Calibre a régua micrométrica com uma lâmina-padrão antes de medir. Meça 20–30 esporos individuais para gerar média e desvio-padrão. Variação significativa pode indicar contaminação ou cepa diferente.
- Passo05
Registro fotográfico (opcional)
Se o microscópio tem porta para câmera, fotografe pelo menos 3 campos representativos com escala visível. Inclua no relatório de pesquisa junto com a referência de lote ITS.
- Passo06
Descarte e higienização
Descarte lâminas e lamínulas em recipiente BSL-2. Limpe objetivas com lenço apropriado (Kimwipes + álcool isopropílico). Não use papel comum — risca a lente.